Para el aislamiento y caracterización morfológica se utilizaran los siguiente medios de cultivo:
Medio YMA (Agar Manitol Extracto de Levadura) Díaz, 2010.
Este medio de cultivo es el más usado para Rhizobios y es aplicado para Ochrobactrum (Trujillo, et al ; 2005), se le adiciona el colorante rojo congo que inhibe el crecimiento de Actinomycetes y permite diferenciar a Rhizobios de Agrobacterium. Como los Rhizobios no absorven mucho el colorante se observan de color blanquesino-rosaceo transparente u opaco, mientras que en Agrobacterium se observan colonias rojas.
Reactivos
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Cantidad
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Manitol
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10.0 g
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Extracto de Levadura
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4.0 g
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K2PHO4
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0.5 g
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MgSO4
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0.2 g
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NaCl
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0.1 g
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Agar
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15 g
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Rojo Congo
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81 g/400 mL agua
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Agua destilada
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1 L
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Medio LLA (Levadura-
Lactosa-Agar) tomado de Areadne, et al;
2004
Este medio de cultivo permite realizar el ensayo de Cetolactasa, donde posterior al crecimiento de la colonia se adiciona 10 mL del Reactivo de Benedict y se espera 10 minutos hasta observar un cambio de coloración. Cuando la bacteria es capaz de degradar la lactosa se observa un cambio de coloración después de añadir el reactivo de Benedict (que sucede con Agrobacterium), mientras que en las bacterias que no poseen cambio alguno de coloración no pueden degradar dicha fuente de carbono (Rhizobios).
Así este medio actúa como diferencial al permitir discernir entre Rhizobios y Agrobacterium.
Reactivos
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Cantidad
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Lactosa
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10.0 g
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Extracto de Levadura
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4.0 g
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K2PHO4
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0.5 g
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MgSO4
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0.2 g
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NaCl
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0.1 g
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Agar
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15 g
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Rojo Congo
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81 g/400 mL agua
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Agua destilada
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1 L
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Medio TY (Triptona y Extracto de Levadura) descrito por Díaz, 2010
Este medio de cultivo se ha descrito por Díaz, 2010 como un activador de la infectividad al poseer un bajo porcentaje de extracto de levadura.
Componente
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g.L-1
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Triptona
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5.0
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Extracto de levadura
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3.0
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CaCl2
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1.0
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Agar
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10.0
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Referencias Bibliográficas:
- Díaz, A. (2010). Aislamiento, caracterización y selección de Rhizobia autóctonos que nodulan habichuela roja (Phaseolus vulgaris L.), en la Republica Dominicana. Republica Dominicana.
- Areadne, S., Elías, O., García, M. (2004) Aislamiento y caracterización fenotípica parcial de cepas de rizobios que nodulan leguminosas. Revista Cubana de Ciencia Agrícola, vol 38, num 2, pp. 197-201. Cuba
