Bitácora de Laboratorio

BITÁCORA DE LABORATORIO

 

1. DATOS INFORMATIVOS

DEPARTAMENTO: Ciencias de la Vida               CARRERA: Ingeniería en Biotecnología

NIVEL: 7mo                                                     PERIODO ACADÉMICO: Marzo-Agosto 2014

TITULO DEL PROYECTO:

Caracterización molecular de bacterias nodulantes en Chocho silvestre (Lupinus mutabilis) en Sangolqui- Ecuador.

FASES DEL PROYECTO: Presentación de Perfil e Inicio.

COORDINADOR DEL PROYECTO: Alma Koch Kaisier

TUTOR DEL PROYECTO INTEGRADOR: Marco Vinicio Taipe

DOCENTES Y ASIGNATURAS QUE APORTAN AL P.I.:

NOMBRE DOCENTE                             ASIGNATURA

   1. Alma Koch Kaisier                          Microbiología

GRUPO DE PROYECTO:

 María Alejandra Oviedo

FECHA: 30/06/2014

Se preparó medios de cultivo para realizar la diferenciación de la bacteria, (los medios fueron publicados anteriormente en la página)

FECHA: 02/07/2014

Se preparó medios para las pruebas bioquímicas que se realizarán a las bacterias:

Tabla 1: Medios de Cultivo usados para Pruebas Bioquímicas.

MEDIO DE CULTIVO	FÓRMULA PARA 1 LITRO
Triple Sugar Iron, TSI	Se diluyen 65 g
Gelatina Nutriente	Se diluyen  128 g.
Agar Anaeróbico	Se diluyen  58 g.
Urea Agar	Se diluyen  29 g.
Soluble Starch+ Agar	Se coloca el agar con agua a esterilizar sin el almidón, debido a que el almidón resulta ineficiente tras el autoclavado. Agar: 20 g. Almidón: 29 g.
Triptona	Se diluyen 15 g.
Phenol Broth Base	Se diluyen 15 g. Se autoclava este medio y después se adiciona por separado: Glucosa: 5 g. Manitol: 5g. Lactosa: 5g.
Phenylalanine Agar	Se diluyen  23 g.
Litmus Milk	Se diluyen 100 g.
Kliger Agar	Se diluyen  52 g.
Caldo Nitrato	Se diluyen  9 g.

Se inoculo las bacterias en medio YMA con Rojo Congo a dos temperaturas: a temperatura Ambiente y a 35°C. Se comprobará el crecimiento de las bacterias nodulantes a estas dos temperaturas a las 24 y 72 horas.

FECHA: 03/07/2014
Se observó el crecimiento de las bacterias a las 14 horas en temperatura ambiente y a 35°C. Se comprobó que pueden crecer a las dos temperaturas, no se observa la formación de colonias pero se observan de color rosado y poca mucosidad.
Cajas en Medio YMA con Rojo Congo a 35° C
Hay poco crecimiento y baja mucosidad, la colonia es de color blanquecino semi - traslúcido y posee un color púrpura alrededor de si misma.

Cajas en Medio YMA con Rojo Congo a Temperatura Ambiente

Hay un gran crecimiento y mucosidad media, son colonias transparentes rosaceas sin ninguna coloración como se observa en las cajas que crecieron a 35°C.

Se determinó que el mejor crecimiento de las bacterias nodulantes en medio de cultivo YMA- Rojo Congo es a Temperatura Ambiente, a partir de este punto se mantendrán las bacterias a esta temperatura para todas las pruebas bioquímicas y la extracción de ADN.

FECHA: 05/07/2014
Tras tres días de crecimiento se observó que las bacterias nodulantes dejan de crecer a 35°C por ende esta temperatura no es adecuada para estas bacterias.
Se determinó que el crecimiento adecuado de las bacterias a temperatura ambiente oscila entre los 2 y 3 días, siendo bacterias de crecimiento rápido.

FECHA: 07/07/2014
Se preparó medio LLA (Levadura Lactosa Agar), donde se sustituye el Manito por la Lactosa en el medio YMA (Agar Manitol Extracto de Levadura).

Tabla 2: Medio LLA (Levadura- Lactosa-Agar) tomado de Areadne, et al; 2004

Reactivos	Cantidad
Lactosa	10.0 g
Extracto de Levadura	4.0 g
K2PHO4	0.5 g
MgSO4	0.2 g
NaCl	0.1 g
Agar	15 g
Rojo Congo	81 g/400 mL agua
Agua destilada	1 L

Además se autoclavaron tubos de tipo rosca con agua estéril para realizar diluciones seriadas acorde al Método descrito por Manual de Microbiología de Benson. Mediante este método se obtendrán colonias aisladas para observar su tamaño y morfología.

FECHA: 10/07/2014
Se prepararon las diluciones de la bacteria para obtener colonias aisladas para identificarlas, en primer lugar se colocaron dos asas llenas de bacteria en 9 mL de ADE (Agua Destilada Estéril), se mezclo suavemente y se colocó 1 mL de este tubo en 9 mL de ADE del siguiente tubo; se continuó este proceso hasta diluciones de 10^-4
Se colocó  1 mL de muestra tomado de cada disolución y se extendió con un triángulo de vidrio estéril en cajas petri de 9 cm de diámetro con medio YMA Rojo Congo y en cajas con medio LLA.
Además se inocularon las bacterias en cajas petri de 5 cm de diámetro con medio YMA Rojo Congo para realizar la prueba de Catalasa y Oxidasa. Además se inocularon tubos de ensayo con caldo Urea.
Los resultados se observaran el día Lunes 14 donde se medirá el tamaño de las colonias y se realizaran las pruebas de Catalasa y Oxidasa.